暗夜下的高谭市，迎来新一年的万圣节。偏偏就在这样一个宁静的夜晚，银嗓女妖（Kari Wuhrer 配音）救出所罗门格兰迪，在闹市区繁华街道引发混乱，危机时刻蝙蝠侠（Roger Craig Smith 配音）、绿箭侠（Chris Diamantopoulos 配音）等正义战士出现，暂时化解危机。在此之后，稻草人、泥面人随同前面两个恶棍接连登场，而他们的幕后指使正是诡计多端、邪恶狡猾的小丑（Troy Baker 饰）。此时此刻，小丑正策划邪恶的阴谋，他试图在高谭市传播一种能令人狂笑的电脑病毒，足以使这座城市陷入前所未有的混乱。蝙蝠侠、绿箭侠以及生化人（Khary Payton 配音）、夜翼（Will Friedle 配音）还有红罗宾（Yuri Lowenthal 配音）出动迎战……

本片讲述的是蝙蝠侠（罗杰·克雷格·史密斯 配音）以及罗宾联合正义联盟成员闪电侠以及绿箭侠一起对抗被称为Animilitia的犯罪组织。该犯罪组织都是由一些动物性的成员组成，包括银背大猩猩、猎豹女、杀手鳄鱼等，他们在高谭市作恶多端，一般警察对他们束手无策。而且该组织背后的主谋却指向蝙蝠侠的宿敌，同时也是高谭市叱吒风云的黑道大亨企鹅人（Dana Snyder 配音）。除了Animilitia组织，蝙蝠侠他们这次还要面对奥斯瓦德公司的商人新发明的邪恶网络动物机器人，一群犯罪恶势力再次聚集在高谭市。